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研究發(fā)現(xiàn)ELISA試劑盒的保溫方法
更新時間:2015-04-24   點擊次數:606次

實驗表明,兩次抗原抗體反應一般在37℃經1~2小時,產物的天生可達。濕盒應先放在保溫箱中預溫至劃定的溫度,特別是在氣溫較低的時候更應如斯。抗原抗體反應的完成需要有一定的溫度和時間,這一保溫過程稱為溫育,有人稱之為孵育,在ELISA試劑盒中似不恰當。這就是為什么ELISA反應老是需要一定時間的溫育。為加速反應,可進步反應的溫度,有些試驗在43℃進行,但不宜采用更高的溫度。ELISA屬固相免疫測定,抗原、抗體的結合只在固相表面上發(fā)生。 
溫育常采用的溫度有43℃、37℃、室溫順4℃等。室溫溫育時要平置于操縱臺上即可。這是一個逐步平衡的過程,因此需經擴散才能達到反應的終點。一般有兩次抗原抗體反應,即加標本和加酶結合物后。不管是水浴仍是濕盒溫育,反應板均不宜疊放,以保證各板的溫度都能迅速平衡。以抗體包被的夾心法為例,加入板孔中的標本,其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結合的機會,只有zui貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。37℃是實驗室中常用的保溫溫度,也是大多數抗原抗體結合的合適溫度。 
保溫的方式除有的ELISA儀器附有特制的電熱塊外,一般均采用水浴,可將ELISA試劑盒板置于水浴箱中,ELISA試劑盒板底應貼著水面,使溫度迅速平衡。為避免蒸發(fā),板上應加蓋,也可用塑料貼封紙或保鮮膜籠蓋板孔,此時可讓反應板漂浮在水面上。若用保溫箱,應放在濕盒內,濕盒要選用傳熱性良好的材料如金屬等,在盒底墊濕的紗布,zui后將ELISA板放在濕紗布上。應留意溫育的溫度和時間應按劃定力求正確??乖贵w反應4℃更為*,在放射免疫測定中多使反應在冰箱中,以形成zui多的沉淀。室溫溫育的反應,操縱時的室溫應嚴格限制在劃定的范圍內,尺度室溫溫度是指20~25℃,但詳細操縱時可根據仿單的要求控制溫育。在其后加入的酶標記抗體與固相抗原的結合也同樣如斯。為保證這一點,一個人操縱時,一次不宜多于兩塊板同時測定.。但因所需時間太長,一般不予采用。

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